VormingWetenskap

Fluoressensie mikroskopie: beginsels van die metode

Absorpsie en re-emissie van lig verdere anorganiese en organiese vloeistowwe is die gevolg van fosforessensie of fluoressensie. Die verskil tussen die verskynsels is die duur van die interval tussen absorpsie en vrystelling van lig vloed. Wanneer die fluoressensie van hierdie prosesse plaasvind byna gelyktydig, terwyl fosforessensie - met 'n paar vertraging.

historiese inligting

In 1852 het die Britse wetenskaplike Stokes, die eerste keer beskryf fluoressensie. Hy het 'n nuwe termyn as gevolg van die eksperimente met vloeispaat, wat rooi lig uitstraal onder ultraviolet lig. Stokes het opgemerk 'n interessante verskynsel. Dit is bevind dat die golflengte van die fluorescent bestraling is altyd groter as die vloei van die opwekking lig.

Om die hipotese in die 19de eeu bevestig daar baie eksperimente gewees het. Hulle het getoon dat 'n verskeidenheid van monsters fluorescerende onder die invloed van ultraviolet lig. Onder die materiaal, onder andere, was kristalle, harpuis, minerale, chlorofil, ru-middels, anorganiese verbindings, vitamiene, olies. Die direkte gebruik van kleurstowwe vir biologiese toetse begin eers in 1930

Fluoressensie mikroskopie: beskrywing

Sommige van die gebruik in die eerste helfte van die 20ste eeu studies materiaal uitgestal hoë spesifisiteit. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. Te danke aan die prestasie, wat nie bereik kan word deur kontrasterende metodes, het die metode van fluoressensie mikroskopie 'n noodsaaklike hulpmiddel in biomediese en biologiese navorsing word. Ewe belangrik resultate is verkry, en vir materiaal.

? Watter voordele nie die metode van fluoressensie mikroskopie? Die gebruik van nuwe materiale het moontlik geword en die keuse van hoogs spesifieke sel submikroskopiese komponente. Fluoressensie mikroskopie kan enkele molekules op te spoor. 'N Verskeidenheid van kleurstowwe toelaat dat die identifisering van verskeie items in 'n keer. Ten spyte van die beperkte ruimtelike resolusie van die diffraksie limiet van die toerusting, wat op sy beurt, hang af van die spesifieke eienskappe van die monster, die identifisering van molekules onder hierdie vlak is ook heel moontlik. Verskeie monsters na bestraling uitstalling motor fluorescentie. Hierdie verskynsel is wyd gebruik word in petrologie, plantkunde, die halfgeleier nywerheid.

funksies

Bestudeer diereweefsel of patogene dikwels ingewikkeld of te swak of baie sterk niespesifieke motor fluorescentie. Maar die waarde in studies verkry inleiding in die materiaal komponente opgewonde op 'n spesifieke golflengte en afgee die nodige lig vloei intensiteit. Fluorochrome optree as kleurstowwe in staat onafhanklik verbonde aan strukture (sigbare of onsigbare). So het hulle 'n hoë selektiwiteit om die teiken, en die kwantum opbrengs.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. Fluoressensie mikroskopie is wyd gebruik sedert die koms van natuurlike en sintetiese kleurstowwe. Hulle het sekere intensiteit profiele van die emissie en opwekking en wat gerig is op spesifieke biologiese teikens.

Identifisering van individuele molekules

Dikwels, in ideale omstandighede, jy kan 'n aparte element gloed registreer. Vir hierdie, onder andere, is dit nodig om 'n voldoende lae geraas van die detector en die optiese agtergrond verskaf. Fluoressien molekule tot mislukking as gevolg van photobleaching kan uitstraal tot 300 duisend. Fotone. Teen 20% versameling doeltreffendheid van die proses en kan hulle registreer in 'n bedrag van ongeveer 60 duisend.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. Fluoressensie mikroskopie gebaseer op stortvloed Fotodiodes of elektroniese vermenigvuldiging, toegelaat word om die navorsers om die gedrag van individuele molekules te neem deur middel van die tweede, en in sommige gevalle selfs minute.

kompleksiteit

'N Belangrike kwessie ten gunste van die onderdrukking van optiese geraas agtergrond. As gevolg van die feit dat baie van die wat in die ontwerp van filters en lense uitstal sommige motor fluorescentie materiaal, die pogings van wetenskaplikes in die vroeë stadiums is gerig op die produksie van komponente met 'n lae fluoressensie. Tog het die daaropvolgende eksperimente het gelei tot nuwe gevolgtrekkings. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. In die besonder, is daar gevind dat fluoressensie mikroskopie, gebaseer op die totale interne weerkaatsing, dit moontlik maak om 'n lae agtergrond en 'n hoë intensiteit opwekking lig te bereik.

meganisme

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. Die beginsels van fluoressensie mikroskopie, gebaseer op die totale interne weerkaatsing is die gebruik van verganklike golf of verganklike. Dit kom by die grens tussen media met verskillende refraktiewe indekse. In hierdie geval, die ligstraal beweeg deur die prisma. Dit het 'n hoë brekingsindeks parameter.

Die prisma aangrensend aan die waterige oplossing of glas met 'n lae parameter. As 'n ligstraal wat gerig is op dit teen 'n hoek wat meer krities, is die bundel heeltemal weerspieël van die koppelvlak. Hierdie verskynsel het op sy beurt, veroorsaak nonpropagating golwe. Met ander woorde, die gegenereerde elektromagnetiese veld wat dring in 'n medium met 'n laer brekingsindeks parameter om 'n afstand minder as 200 nanometer.

Die verganklike golf intensiteit van die lig sou voldoende wees om fluorophores opgewonde wees. Maar as gevolg van sy uiters klein diepte, sy volume sal baie klein wees. Die resultaat is 'n lae-vlak agtergrond.

verandering

Fluoressensie mikroskopie is gebaseer op totale interne weerkaatsing, geïmplementeer kan word met epi-verligting. Dit vereis lense met 'n hoë numeriese diafragma (ten minste 1.4, maar dit wenslik dat dit bereik 1,45-1,6 is), en gedeeltelik verlig veld apparaat. Laasgenoemde word gedoen met 'n klein kolletjie grootte. Vir 'n groter eenvormigheid met behulp van 'n dun ring, wat is geblokkeer deur 'n gedeelte van die stroom. Vir die kritieke hoek, waarna daar 'n totale weerspieëling, moet ons 'n hoë vlak van refraksie van die onderdompeling medium in die lens en die dekking glas van die mikroskoop.

Similar articles

 

 

 

 

Trending Now

 

 

 

 

Newest

Copyright © 2018 af.birmiss.com. Theme powered by WordPress.